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慢病毒载体构建与包装
2017-12-26 10:43:05
麒盟生物慢病毒包装

个性化定制,最快10天时间发货

麒盟生物慢病毒包装简介
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

 
麒盟生物服务项目
上海麒盟生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建的个性化定制服务,同时提供相对应的细胞技术服务。

麒盟生物慢病毒包装实验流程
1.慢病毒过表达质粒载体的构建
设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。
2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。
3.miRNA载体构建从Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。
4.慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

 


 
 
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