一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建,6折钜惠 - 市场活动 - 上海麒盟生物科技有限公司
服务热线:021-68821186 021-68820187
  高级搜索
您的位置:首页 -> 资讯中心 -> 市场活动
一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建,6折钜惠
2017-10-10 16:33:43

一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建

慢病毒是将含基因的载体转入大部分哺乳动物细胞最有效的工具,转导的慢病毒载体携带基因可以和细胞基因组DNA整合,从而稳定,长期对基因水平进行调控。通过一套高效的高滴度慢病毒生产系统,能应用于大规模慢病毒生产。病毒滴度可高达10E8-E9TU/ML。利用不同的腺病毒载体系统可分别适用于在各类细胞中稳定过量表达、敲减和敲除不同大小的外源基因。
同时,由于大多数公司只销售体外构建的慢病毒,然而由于细胞异质性,往往在用户进行后续细胞实验过程中不能达到感染效率和预期基因表达水平改变。为简便用户在使用慢病毒筛选细胞稳转株时的繁琐过程,以及保障在不同细胞株中具有确定感染和基因改变效率,推出一站式慢病毒稳转细胞株筛选构建服务,针对用户需要进行功能实验的细胞,通过慢病毒载体上的G418或puromycin抗性进行慢病毒稳转细胞株筛选。用户在60-90天内可直接拿到经过表达鉴定的相应慢病毒稳转细胞株。可以广泛用于癌症、肿瘤、代谢性疾病等相关机制研究。

1. 基因过表达慢病毒稳转细胞株(LentiOE-Stable)

用于上调基因的高纯度慢病毒进行特定稳转细胞株筛选,适用于在各类细胞中稳定过量表达不同大小的外源基因。

1.       目的基因合成和表达载体构建
1)  目的基因合成
2)  选择合适的表达载体,目的基因合成后直接连接构建
3)  测序验证
2.       表达质粒载体
1)  质粒转化细菌扩增
2)  质粒抽提纯化
3)  酶切电泳以及测序再验证
3.       慢病毒包装
1)  试剂:表达载体、慢病毒载体系统、293T细胞和转染试剂
2)  共孵育及收集含病毒上清液
3)  病毒纯化和浓缩
4)  病毒保存(-80℃)
4.       慢病毒感染目的细胞预实验
1)  优化条件:细胞种板密度、病毒最适MOI、是否需要polybrene辅助感染试剂等
2)  荧光观察或者FACS检测感染效率
5.       药物筛选浓度优化
1)  药物浓度梯度
2)  处理48小时后细胞全部死亡的最低药物浓度为后续实验拟用浓度
6.       正式实验
1)  慢病毒感染
2)  荧光观察
3)  药物筛选多克隆细胞稳转株(或者FACS分选表达GFP的细胞)
4)  有限稀释单克隆细胞株筛选及扩大培养
7.       鉴定
1)  荧光拍照
2)  目的基因qPCR检测
3)  Flag或目的基因表达蛋白的Western blot检测

2. 基因敲减慢病毒稳转细胞株(LentiKD-Stable)

用于下调基因的高纯度慢病毒进行特定稳转细胞株筛选,适用于在各类细胞中稳定抑制同源基因的表达。

1.       选择至少3个不同的靶点,设计shRNAs
2.       合成对应的序列并构建表达载体
3.       后续慢病毒感染细胞及筛选,步骤基本与LentiOE-Stable相同
4.       注意事项
1)  单克隆分析前需要筛选出干扰效率最高的siRNA。经抗药基因初步筛选后,提取RNA以qPCR检测目的基因干扰效率。
2)  筛选出的siRNA再进行单克隆分析,以qPCR检测筛选出干扰率最高的稳转株,再以WB鉴定选出敲减效果最好的稳转株。
3)  需关注细胞存活率和生长状态。某些基因敲减会造成生长缓慢或者致死表型,因此药物筛选会有影响,需要将细胞以低密度种板进行单克隆筛选,或者可选择FACS分选表达GFP的细胞再分析。也可选择可诱导型RNAi表达载体。

3. CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株(LentiCas9-Stable)

使用CRISPR/CAS9技术实现基因敲除的高效慢病毒进行特定稳转细胞株筛选。应用于任何物种基因组特定位点的精确编辑,并进行细胞水平单基因或多基因敲除;结合Cas9技术同时导入针对潜在位点的多个sgRNA,敲除多个基因位点产生突变,模仿疾病的发生,通过改造得到一系列疾病模型;通过修正某些致病基因,可进行单基因遗传病的研究。

1.       选择至少3个不同的靶点
2.       Cas9载体构建
3.       慢病毒感染及筛选同前
说明:本项实验重点在于前期序列设计及载体构建。
4.服务优势
拥有成熟稳定的稳转细胞系筛选平台,技术多样化,并且可以结合客户特殊需求,灵活地定制服务。稳转细胞株无细菌、真菌及支原体污染,其生长状态、活率及目的蛋白表达水平至少20代保持稳定。
5.    服务须知
 
客户只需提供基因信息。 
服务项目 公司提供 交付产物 实验
周期
慢病毒稳转细胞株构建预实验 1、待感染的靶细胞系和培养方法 1、GFP对照慢病毒的感染荧光图
2、预实验总结
2周
基因过表达慢病毒稳转细胞株(LentiOE-Stable) 1、慢病毒
2、慢病毒滴度信息
3、待感染的靶细胞系和培养方法
4、western-blot的一抗
1、目的稳转细胞株
2、对照稳转细胞株
3、western-blot/qPCR原始结果
4、详细实验报告
6-10周
基因敲减慢病毒稳转细胞株(LentiKD-Stable) 1、慢病毒
2、慢病毒滴度信息
3、待感染的靶细胞系和培养方法
4、western-blot的一抗
1、目的稳转细胞株
2、对照稳转细胞株
3、western-blot/qPCR原始结果
4、详细实验报告
6-10周
CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株(LentiCas9-Stable) 1、慢病毒
2、慢病毒滴度信息
3、待感染的靶细胞系和培养方法
4、western-blot的一抗
1、目的稳转细胞株
2、对照稳转细胞株
3、western-blot/qPCR原始结果
4、详细实验报告
6-10周
 
 
6.项目报价
 
 
 
 
 
过表达稳转株
基因合成及质粒提取 具体价格需要根据目标基因的长度确定,此价格以1500bp为例。  
原价
38000元
 
现价(6折)
22000元
病毒包装及预实验  
稳转株筛选 筛选出3个单克隆
qPCR和WB鉴定 目标基因抗体费用已包含,以小包装2500元计算
  序列合成及载体构建 构建3个不同靶点的shRNA载体  
原价
34000元
 
现价(6折)
20000元
 
敲减稳转株
病毒包装及预实验 需要筛选出一个最有效的shRNA载体
稳转株筛选 筛选出3个单克隆
qPCR和WB鉴定 目标基因抗体费用已包含,以小包装2500元计算
  序列合成及载体构建 构建3个不同靶点的载体  
原价
35000元
 
现价(6折)
21000元
 
Cas9敲除
病毒包装及预实验 需要筛选出一个最有效的shRNA载体
稳转株筛选 筛选出3个单克隆
qPCR和WB鉴定 目标基因抗体费用已包含,以小包装2500元计算
 
7.费用说明
1.       不同的项目需要根据目标基因的特点进行调整,价格也会有所不同。
2.       所列价格为针对普通细胞系,对于难转细胞,比如某些难转细胞系、干细胞或原代细胞等需要根据实际情况进行调整费用。
3.       载体以每个项目共1000元计,抗体以小包装2500元计。如果实际情况多于此费用则需要做相应调整。
4.       所列费用为实验顺利情况下的费用,实际操作中构建稳转株风险会比较大,未必能一次成功。
 
实验的具体周期及实验费用:详情请咨询我司技术经理
公司电话:021-6882118618601778678
联系人:杨博士
上海麒盟生物科技有限公司
拥有干细胞研究中心,主营细胞、分子实验技术服务、SCI论文服务、干细胞三细分化试剂盒、小鼠快速基因型鉴定试剂盒、高纯度无外泌体血清、无血清培养基等,欢迎广大科研爱好者前来咨询选购!

 



走进麒盟 技术服务 产品中心 资讯中心
关于我们
合作联盟
干细胞研究中心
诚聘英才
一站式服务
干细胞技术
细胞生物技术
分子生物技术
免疫学技术
组织病理技术
动物实验
SCI论文服务
病毒技术服务
其他服务
干细胞产品
试剂
细胞库
手机站
公司资讯
行业资讯
技术资料
市场活动
电话:021-68821186 021-68820187    邮箱:chembio@chembio-engine.com
版权所有:上海麒盟生物科技有限公司 备案号:沪ICP备16004951号
 
QQ在线咨询
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息