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流式细胞分选
2016-01-06 17:20:42

流式细胞分选

实验原理 
     流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选,能将复杂样品中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单克隆分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间差异研究。

技术应用 
     流式细胞分选可分选得到高纯度、高活性的稀有细胞,通过直接培养、诱导、增殖、分化、活化和移植等进行更深一步的细胞功能和细胞治疗探索。如荧光稳转株筛选、干细胞筛选、上皮细胞筛选、造血干细胞分选等。

实验步骤

  1. 收集细胞:若为贴壁细胞,待细胞生长达到80%-90%融合后,弃掉培养液,用2ml D-PBS洗细胞,加入胰酶消化细胞,待细胞变圆后,加入完全培养基终止消化,收集细胞悬液至15ml离心管中;若为悬浮细胞,则吸取细胞悬液至离心管中。

  2. 1000rpm离心5min,弃上清,加入D-PBS悬浮细胞。

  3. 1000rpm离心5min,弃上清。

  4. 加入500μl D-PBS悬浮细胞,分别加入抗体,4℃条件下孵育30min后,用流式分选细胞仪进行细胞分选。

注意事项

  1. 若分选得到的细胞需要继续培养,则整个操作过程需要无菌。

  2. 保证上机样品为单细胞悬液。

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