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免疫组织化学专题系列(二)抗体那些事儿 点击下载

上回咱们说到免疫组织化学究竟是个啥,不知各位看客、战友有啥收获?从今天开始,我们开通了评论和留言功能,您可以在下方直接发表您的看法或直接针对性地提出问题,我们会及时跟您反馈,并希望能给您满意的答案。

 

好吧,言归正题,今天我们主要聊聊免疫组化中重要的人物——抗体。抗体都长什么样的嘴脸?我们该如何让它们臣服于我们的实验?也许看完一下卡片中的内容您也能“胸有成竹”啦。

 

 

抗体那些事儿

抗体的类型:

抗体分为单克隆抗体、混合型单克隆抗体和多克隆抗体。

 

单克隆抗体(monoclonal antibodies),常用的有鼠源性单抗和兔源性单抗。单抗的优点是具有很高的抗原识别特异性,在免疫组化染色中非特异性染色背景低单抗的不足之处在于当因固定等因素使对应抗原决定簇的空间结构发生改变时会造成单抗识别度减弱或无法识别而使染色信号减弱或者呈阴性反应。

 

混合单抗(mixedmonoclonal antibodies),将针对同一蛋白质制造的,识别同一蛋白质不同抗原决定簇的单抗混合即为“混合单抗”。混合单抗在保留了单抗高特异性、低背景优点的同时提高染色的信号强度。

 

多克隆抗体(polyclonalantibody),多抗在制备上大多来源于兔和山羊,多抗产生的特异性信号强度较高,同时产生的非特异性背景信号也比较高。

 

抗体的选择:

应根据检测目的和样本的性质来选择抗体。刺激宿主动物产生抗体的抗原物质种类繁多,包括全长的蛋白、蛋白片段、多肽、整个生物机体(例如细菌)或细胞。

 

如果要检测的是一个蛋白片段或全长蛋白的异构体或特定区域,应该选择由该特异片段或区域或者包含该特异片段或区域所制备的抗体。样本在经固定处理后,可能会引起抗原结构发生改变,应选择一系列在样本经过修复处理后或无需修复即能与对应抗原表位结合的抗体。

为避免免疫组化实验中二抗的免疫球蛋白与样本中内在的免疫球蛋白发生潜在的交叉反应,应尽可能选择和样本的宿主种类来源不同的第一抗体。例如,用于检测鼠源蛋白的一抗可选用来源于兔的一抗和抗兔的标记IgG 二抗进行检测,而不应选择来源于小鼠或大鼠的一抗。如一抗已直接附有标记,则可避免上述交叉反应发生。

 

抗体质量的好坏是完成免疫组化工作的关键,应选择在较高稀释度时染色较佳而背景较低、结果稳定、重复性好的商品化抗体。在订购抗体时,应查看抗体的适用范围(能否于用冰冻切片或石蜡切片,最好是能用于甲醛固定的石蜡切片)、采用何种前处理(酶消化或热抗原修复)以及推荐的抗体最佳稀释度等问题。

 

抗体的稀释度:

抗原抗体反应要求具有一定比例,如果抗体浓度过高,抗体分子多于抗原决定簇,可导致抗体结合减少,产生阴性结果。此阴性结果并不一定是缺少抗原,而是由于抗体过量,这种现象类似于凝集反应中的前带效应;如果抗体浓度过低,抗体只能与部分抗原结合或者结合不到抗原,则不能体现真实的抗原分布或呈阴性反应。因此应进行抗体最佳稀释度的检测。测试需至少进行3个浓度梯度,如果效果不理想,再选择中位浓度进行测试。

 

其他的注意事项:

为确保结果稳定、再现性良好,应避免抗体反复冻融所致的效价降低。第一抗体分装、冷冻保存为佳,其最小包装可为每次用量或2周内用量。所分装的抗体,应注明名称,稀释度、量及日期等,同时应在笔记本详细记录。所用的任何抗体及酶,均应严格记录,妥善管理,才能保证实验成功。

 

各位看官、战友,对于我们关于免疫组化中抗体的那些事儿您有什么看法,说两句呗。嗯嗯,把这个问题解决掉,下回我们再说点啥泥,先卖个关子吧。


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