大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒 - 干细胞诱导分化产品 - 麒盟干细胞中心
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名称:大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒
货号:CHEM-200014
品牌:麒盟生物
详情:
规格:200 ml
价格:1190
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产品名称:大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒
货号:CHEM-200014
批号:见包装
试剂清单:

序号 名称 数量 货号
A 大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化基础培养基A 1 CHEM-200014-A
B 大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化血清 2 CHEM-200014-B
C 双抗 2 CHEM-200014-C
D 胰岛素 2 CHEM-200014-D
E 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 2 CHEM-200014-E
F 罗格列酮 1 CHEM-200014-F
G 地塞米松 1 CHEM-200014-G
H 大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化基础培养基B 1 CHEM-200014-H
I 油红O染色液(储液) 1 CHEM-200014-I
J 明胶溶液 1 CHEM-100001-J
 
存储与有效期:
A、D、H、I、J液于2-8℃避光保存,其余溶液于-20℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温,各组分在所需要的温度下有效期为1年,配制完成的完全培养基于2-8℃保存,有效期为1个月。
产品介绍
大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSC)具有多向分化的潜能,体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会(ISCT)确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目,目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力,麒盟干细胞研究中心精心优化rBMSC成脂诱导分化试剂盒,其中包括成脂诱导培养体系和鉴定所需要的染色液,让用户可以稳定有效地鉴定rBMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法,用于鉴定rBMSC是否具有成骨分化能力。除此以外,试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测,如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意脂肪颗粒导致的自发荧光或遮光问题。
本产品仅适用于科研。
操作方法
实验准备
  试剂配制:
2-8℃冰箱中过夜溶解B液2支。
注意:解冻后的血清有时会出现沉淀,这些沉淀不影响血清的质量,不必做过滤等处理。
诱导液A:室温融化C、F、G溶液各1支和E 溶液2支,将融化的溶液全部加入A液中,然后将B、D液各1支加入A液中,晃动培养基使其充分混匀,配制成诱导液A。
诱导液B:将B、D液各1支加入H液中,晃动培养基使其充分混匀,配置成诱导液B。
油红O染液(工作液):取油红O储液,与蒸馏水以3:2的比例混合均匀,中性滤纸过滤,即配制成了油红O染液(工作液)。
注意:溶液溶解后旋涡混匀、1000g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A/H液后,吸取A/H液洗涤溶液瓶两次,将洗涤液加入A/H液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀,2-8℃保存。E液较难溶解,需提前复温,反复摇动,在加入A液前须保证完全溶解。诱导液B可在需要时现配。整个过程需无菌操作,适当以75%酒精擦拭表面。
  培养皿处理:
加适量明胶溶液到培养器皿中,轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面,室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液,室温晾干。
注意:本试剂盒建议使用六孔板操作,每孔加明胶溶液1 ml,使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作,避免污染。
  自备试剂:
l  消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA )
l  磷酸盐缓冲液(DPBS)
l  rBMSC完全培养基
l  4%中性多聚甲醛溶液
注意:若rBMSC完全培养基不含血清,则需要准备胰酶抑制剂。rBMSC消化极易过度,建议稀释消化液一倍,且严格控制消化时间。
操作步骤
1.       准备所需诱导分化的rBMSC,当细胞融合达85%左右时,用消化液消化细胞,并用rBMSC完全培养基重悬。
2.       按照3×104cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中,每孔rBMSC完全培养基2 ml,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:细胞密度为该试剂盒的标准密度,若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。
3.       当细胞融合达80%时,弃去原培养上清,添加诱导液A 2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:成脂诱导后细胞易脱壁,换液时完全培养基必须经37复温。添加培养基时动作要轻柔,避免吹起细胞。
4.       诱导培养72 h后弃去原培养上清,添加诱导液B 2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
5.       诱导培养24 h后弃去原培养上清,添加诱导液A 2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
6.       重复步骤4、5约3-5次,待细胞内出现明显脂滴时更换为诱导液B继续培养。
7.       每2天更换新鲜诱导液B,继续培养至脂滴足够大时培养结束。
注意:换液时诱导液必须经过复温,否则影响诱导效果和可能导致细胞脱壁。根据实验需要选择培养结束时间,若成脂面积过大或脂滴过大导致连成片则不利于结果的呈现,建议提前终止。
8.       诱导培养结束时,弃去培养上清,DPBS洗细胞两次,4%中性多聚甲醛溶液2 ml/well室温固定细胞20分钟。
注意:培养结束时或中途可以选择其他检测方法,如基因表达检测等,若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。
9.       弃去固定液,DPBS洗2次,加入油红O染液1 ml/well染色15分钟。
注意:该步骤适用于鉴定成脂能力,若出现脂滴(脂肪细胞)则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片,则染色时间需自己掌握。
10.   弃去油红O染液,DPBS洗3次。
11.   显微镜下观察并拍照。
12.   结果判定:按照程序操作完毕,低倍镜下观察可见大面积红色着色点,20倍和40倍镜下可观察到红色球形在细胞内的情况,此红色着色球为脂滴,说明实验所用的rBMSC具有成脂能力。否则,所使用的rBMSC无成脂能力。
结果展示

 

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本产品仅适用于科研。

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