猪骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒 - 干细胞诱导分化产品 - 麒盟干细胞中心
服务热线:021-68821186
  高级搜索
您的位置:首页 -> 产品中心 -> 干细胞诱导分化产品
名称:猪骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒
货号:CHEM-200025
品牌:麒盟生物
详情:
规格:200 ml
价格:1190
联系方式:chembio@chembio-engine.com    QQ: 点击这里给我发消息

说明书下载

产品名称:猪骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒
货号:CHEM-200025
批号:见包装
试剂清单:

序号 名称 数量 货号
A 猪骨髓间充质干细胞成骨分化培养基 2 CHEM-200025-A
B 猪骨髓间充质干细胞成骨分化血清 2 CHEM-200025-B
C 双抗 2 CHEM-200025-C
D 抗坏血酸 2 CHEM-200025-D
E β-甘油磷酸钠 2 CHEM-200025-E
F 地塞米松 2 CHEM-200025-F
G 茜素红染液 1 CHEM-200025-G
H 明胶溶液 1 CHEM-100001-H
 
存储与有效期:
A、G、H液于2-8℃避光保存,B-F液于-20℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温,各组分在所需要的温度下有效期为1年,配制完成的完全培养基于2-8℃保存,有效期为2个月。
产品介绍
猪骨髓间充质干细胞(pBMSC)具有多向分化的潜能,体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会(ISCT)确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目,目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力,麒盟干细胞研究中心精心优化pBMSC成骨诱导分化试剂盒,其中包括成骨诱导培养体系和鉴定所需要的染色液,让用户可以稳定有效地鉴定pBMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法,用于鉴定pBMSC是否具有成骨分化能力。除此以外,试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测,如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意钙沉积导致的自发荧光问题。
本产品仅适用于科研。
操作方法
实验准备
  试剂配制:
2-8℃冰箱中过夜溶解B液1支。
注意:解冻后的血清有时会出现沉淀,这些沉淀不影响血清的质量,不必做过滤等处理。
室温融化C、D、E、F溶液各1支,将融化的溶液全部加入1瓶A液中,然后将B液加入A液中,充分混匀。
注意:C、D、E液先于F液20分钟溶解、溶解后旋涡混匀、1000g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A液后,吸取A液洗涤溶液瓶两次,将洗涤液加入A液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀,2-8℃保存。整个过程需无菌操作,适当以75%酒精擦拭表面。
  培养皿处理:
加适量明胶溶液到培养器皿中,轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面,室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液,室温晾干。
注意:本试剂盒建议使用六孔板操作,每孔加明胶溶液1 ml,使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作,避免污染。
  自备试剂:
l  消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA )
l  磷酸盐缓冲液(DPBS)
l  pBMSC完全培养基
l  4%中性多聚甲醛溶液
注意:若pBMSC完全培养基不含血清,则需要准备胰酶抑制剂。pBMSC消化极易过度,建议稀释消化液一倍,且严格控制消化时间。
操作步骤
1.      准备所需诱导分化的pBMSC,当细胞融合达85%左右时,用消化液消化细胞,并用pBMSC完全培养基重悬。
2.      按照4×104cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中,每孔pBMSC完全培养基2 ml,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:细胞密度为该试剂盒的标准密度,若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。
3.      当细胞融合达60%时,弃去培养上清,每孔添加pBMSC成骨诱导分化完全培养基2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:成骨诱导后细胞极易脱壁,换液时完全培养基必须经37复温。添加培养基时动作要轻柔,避免吹起细胞。
4.      每3天更换新鲜的pBMSC成骨诱导分化完全培养基,持续培养2-4周。
注意:一般10天左右出现钙沉淀,培养液会较原先浑浊。根据需要可以选择培养终止时间,但不易超过4周。
5.      诱导培养结束时,弃去培养上清,DPBS洗细胞两次,4%中性多聚甲醛溶液2 ml/well室温固定细胞20分钟。
注意:培养结束时或中途可以选择其他检测方法,如基因表达检测等,若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。
6.      弃去固定液,DPBS洗2次,加入茜素红染液1 ml/well染色15分钟。
注意:该步骤适用于鉴定成骨能力,若出现钙沉积则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片,则染色时间需自己掌握。
7.      弃去茜素红染液,DPBS洗3次。
8.      显微镜下观察并拍照。
9.      结果判定:按照程序操作完毕,低倍镜下观察可见红色着色点,此处为钙结节,说明实验所用的pBMSC具有成骨能力。否则,所使用的pBMSC无成骨能力。
结果展示

   

相关产品
名称 货号
猪骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒 CHEM-200026
猪骨髓间充质干细胞成软骨分化试剂盒  
CHEM-200027
 
 


本产品仅适用于科研。

走进麒盟 技术服务 产品中心 资讯中心
关于我们
合作联盟
干细胞研究中心
诚聘英才
科研课题一站式服务
干细胞技术
细胞生物技术
分子生物技术
免疫学技术
组织病理技术
动物技术
SCI、论文服务
慢病毒及稳转细胞株技术
数据统计分析
药物筛选
外泌体技术
干细胞诱导分化产品
试剂
细胞库
手机站
外泌体
慢病毒载体构建与包装
公司资讯
行业资讯
技术资料
市场活动
电话:021-68821186     邮箱:chembio@chembio-engine.com
版权所有:上海麒盟生物科技有限公司 备案号:沪ICP备16004951号
 
QQ在线咨询
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息