人骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒 - 干细胞诱导分化产品 - 上海麒盟生物科技有限公司
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名称:人骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒
货号:CHEM-200001
品牌:麒盟生物
详情:
规格:200 ml
价格:1190
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产品名称:人骨髓间充质干细胞成骨分化试剂盒
货号:CHEM-200001
批号:见包装
试剂清单:

序号 名称 数量 货号
A 人骨髓间充质干细胞成骨分化培养基 2 CHEM-200001-A
B 人骨髓间充质干细胞成骨分化血清 2 CHEM-200001-B
C 双抗 2 CHEM-200001-C
D 抗坏血酸 2 CHEM-200001-D
E β-甘油磷酸钠 2 CHEM-200001-E
F 地塞米松 2 CHEM-200001-F
G 茜素红染液 1 CHEM-200001-G
H 明胶溶液 1 CHEM-100001-H
 
存储与有效期:
A、G、H液于2-8℃避光保存,B-F液于-20℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温,各组分在所需要的温度下有效期为1年,配制完成的完全培养基于2-8℃保存,有效期为2个月。
产品介绍
人骨髓间充质干细胞(hBMSC)具有多向分化的潜能,体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会(ISCT)确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目,目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力,麒盟干细胞研究中心精心优化hBMSC成骨诱导分化试剂盒,其中包括成骨诱导培养体系和鉴定所需要的染色液,让用户可以稳定有效地鉴定hBMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法,用于鉴定hBMSC是否具有成骨分化能力。除此以外,试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测,如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意钙沉积导致的自发荧光问题。
本产品仅适用于科研。
操作方法
实验准备
²  试剂配制:
2-8℃冰箱中过夜溶解B液1支。
注意:解冻后的血清有时会出现沉淀,这些沉淀不影响血清的质量,不必做过滤等处理。
室温融化C、D、E、F溶液各1支,将融化的溶液全部加入1瓶A液中,然后将B液加入A液中,充分混匀。
注意:C、D、E液先于F液20分钟溶解、溶解后旋涡混匀、1000g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A液后,吸取A液洗涤溶液瓶两次,将洗涤液加入A液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀,2-8℃保存。整个过程需无菌操作,适当以75%酒精擦拭表面。
²  培养皿处理:
加适量明胶溶液到培养器皿中,轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面,室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液,室温晾干。
注意:本试剂盒建议使用六孔板操作,每孔加明胶溶液1 ml,使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作,避免污染。
²  自备试剂:
l  消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA )
l  磷酸盐缓冲液(DPBS)
l  hBMSC完全培养基
l  4%中性多聚甲醛溶液
注意:若hBMSC完全培养基不含血清,则需要准备胰酶抑制剂。hBMSC消化极易过度,建议稀释消化液一倍,且严格控制消化时间。
操作步骤
1.      准备所需诱导分化的hBMSC,当细胞融合达85%左右时,用消化液消化细胞,并用hBMSC完全培养基重悬。
2.      按照4×104cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中,每孔hBMSC完全培养基2 ml,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:细胞密度为该试剂盒的标准密度,若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。
3.      当细胞融合达60%时,弃去培养上清,每孔添加hBMSC成骨诱导分化完全培养基2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:成骨诱导后细胞极易脱壁,换液时完全培养基必须经37复温。添加培养基时动作要轻柔,避免吹起细胞。
4.      每3天更换新鲜的hBMSC成骨诱导分化完全培养基,持续培养2-4周。
注意:一般10天左右出现钙沉淀,培养液会较原先浑浊。根据需要可以选择培养终止时间,但不易超过4周。
5.      诱导培养结束时,弃去培养上清,DPBS洗细胞两次,4%中性多聚甲醛溶液2 ml/well室温固定细胞20分钟。
注意:培养结束时或中途可以选择其他检测方法,如基因表达检测等,若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。
6.      弃去固定液,DPBS洗2次,加入茜素红染液1 ml/well染色15分钟。
注意:该步骤适用于鉴定成骨能力,若出现钙沉积则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片,则染色时间需自己掌握。
7.      弃去茜素红染液,DPBS洗3次。
8.      显微镜下观察并拍照。
9.      结果判定:按照程序操作完毕,低倍镜下观察可见红色着色点,此处为钙结节,说明实验所用的hBMSC具有成骨能力。否则,所使用的hBMSC无成骨能力。
结果展示

   

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名称 货号
人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒 CHEM-200002
人骨髓间充质干细胞成软骨分化试剂盒 CHEM-200003

 


本产品仅适用于科研。

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